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　　缺血性脑卒中是中国居民死亡的主要原因之一，具有高发病率、高致残率、高死亡率的特点，严重危害人类健康。临床上治疗脑缺血的主要方式是恢复血流供应，但血流恢复的同时又会引起再灌注脑损伤，因此受到医学界广泛的关注。脑缺血再灌注损伤过程中有许多机制的参与，如氧化应激、炎症反应、细胞凋亡、线粒体损伤等，这些因素相互作用，引起一系列病理级联反应，造成脑组织损伤，目前仍缺乏有效的治疗手段。随着对自噬作用研究的不断深入，从自噬角度探讨药物对脑缺血再灌注损伤的作用及机制成为现代医学领域研究的热点。自噬是生命体特殊的分解代谢途径，对维持细胞生存及稳态有重要作用。正常生理状态下，自噬处于较低的水平，当受到缺血或缺氧等条件刺激时被激活，研究表明自噬对细胞具有双重作用，适度激活自噬可以保护细胞，而过度自噬可能会对细胞造成一定的损伤。目前，自噬的研究还不太成熟，其具体分子机制及信号通路仍未完全阐明。荭草苷属碳苷黄酮类单体，是中国传统中药金莲花、荭草和竹叶的主要活性成分，临床上常用于治疗冠心病、心绞痛、心血瘀阻等症。课题组前期研究发现，荭草苷对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用，可显著降低大鼠脑梗死体积和改善缺血脑组织的病理形态结构，其保护作用机制是通过抗炎、抗氧化以及降低兴奋性氨基酸的神经毒性实现的。但到目前为止，荭草苷是否通过干预自噬发挥对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用尚未研究。因此，本文从自噬角度研究荭草苷对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用，并探讨其参与的JNK/ERK信号通路，期望为荭草苷的临床用药提供新的作用靶点。本实验采用改良的LONGA线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型MIDDLECEREBRALARTERYOCCLUSION，MCAO模型，大鼠麻醉后使其右侧大脑缺血，在缺血2H后进行再灌注，待大鼠苏醒后进行神经功能评分。结果显示，与假手术组相比，模型大鼠出现不能完全伸展手术对侧前爪或向手术对侧转圈、倾倒等神经缺损症状，评分在1～3分左右，表明MCAO模型的成功建立。1BECLIN1与LC3在脑缺血再灌大鼠脑缺血区的动态表达大鼠随机分为假手术组（SHAM）、脑缺血再灌注I/R组，其中I/R组分为再灌注1H、3H、6H、12H、24H、48H和72H各亚组，SHAM组大鼠只分离颈总动脉，不插入栓线。各组大鼠分别于相应时间点断头取脑，利用免疫组织化学、实时荧光定量PCR和WESTERNBLOT法，检测不同再灌时间点大鼠缺血侧脑皮层BECLIN1与LC3的阳性细胞数、蛋白和MRNA的表达水平，以此选取合适的时间点做后续实验。免疫组化结果表明，与SHAM组相比，I/R组大鼠BECLIN1与LC3的阳性细胞数均显著增多P＜005，P＜001，再灌注开始1～6H增加缓慢，12H时阳性细胞最多，并且持续到24H，之后阳性细胞表达降低。实时荧光定量PCR结果显示，与SHAM组相比，I/R组大鼠BECLIN1与LC3的MRNA表达水平均提高，具有显著性差异P＜005，P＜001，且24H表达最高，24H之后两者MRNA表达降低。WESTERNBLOT结果显示，与SHAM组相比，I/R组大鼠BECLIN1与LC3的相对蛋白表达均增加，具有显著性差异P＜005，P＜001，再灌注开始呈逐渐增加的趋势，于再灌注24H达到峰值，之后LC3的表达维持在较高的水平，而BECLIN1的表达有所降低。2荭草苷对大鼠脑缺血再灌注损伤自噬作用的研究大鼠随机分为SHAM组、I/R组、I/R荭草苷给药组ORI、I/R荭草苷雷帕霉素组（ORIRAP）、I/R荭草苷3甲基腺嘌呤组ORI3MA。给药方式为腹腔注射，大鼠于脑缺血再灌注24H，采用TTC染色检测大鼠脑梗死体积WESTERNBLOT法检测大鼠缺血侧脑皮层目的蛋白BECLIN1、LC3以及磷酸化的AKT和MTOR的表达水平。TTC结果表明，与SHAM组相比，I/R组大鼠脑梗死体积增加，具有显著性差异P＜001ORI给药后大鼠脑梗死体积显著降低P＜005，P＜001与ORI给药组相比，提前给予自噬诱导剂RAP组脑梗死体积有所增加P＜005，而给予自噬抑制剂3MA组脑梗死体积降低（P＜005）。WESTERNBLOT结果显示，与SHAM组相比，I/R组自噬蛋白BECLIN1和LC3以及PAKT和PMTOR的表达增多，具有显著性差异P＜001ORI给药后以上蛋白的表达均显著降低P＜005，P＜001与ORI给药组相比，提前给予自噬诱导剂RAP组自噬蛋白BECLIN1和LC3以及PAKT表达显著增加P＜005，而PMTOR蛋白的表达无显著性差异，给予自噬抑制剂3MA组BECLIN1、PAKT和PMTOR蛋白表达显著降低P＜005，而LC3蛋白的表达变化不显著。3荭草苷对大鼠脑缺血再灌注损伤JNK/ERK信号通路的研究大鼠随机分为SHAM组、I/R组、I/R荭草苷组ORI、I/R荭草苷JNK抑制剂组ORIJNK、I/R荭草苷ERK抑制剂组ORIERK。利用WESTERNBLOT法检测大鼠脑缺血再灌注24H目的蛋白BECLIN1、LC3以及磷酸化的JNK和ERK的表达水平。实验结果显示，与SHAM组相比，I/R组大鼠自噬蛋白BECLIN1、LC3以及PERK和PJNK表达增多，具有显著性差异P＜001与I/R组相比，ORI给药后以上蛋白的表达均显著降低P＜005，P＜001与ORI给药组相比，给予JNK抑制剂组自噬蛋白BECLIN1和LC3表达显著降低P＜005给予ERK抑制剂组PERK和BECLIN1的表达显著降低P＜005，而LC3蛋白的表达无明显变化。综上所述，本研究从自噬角度探讨荭草苷对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用，结果发现荭草苷可能是通过抑制大鼠脑缺血区细胞自噬来发挥对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用，并且JNK与ERK信号通路可能参与荭草苷对大鼠脑缺血再灌损伤保护作用机制。